無菌室：
無菌室一般為4 — 5 平方米、高 2.5 米的獨立小房間（與外間隔離），專辟于微生物實驗室內，可以用板材和玻璃建造。無菌室外要設一個緩沖間，錯開門向，以免氣流帶進雜菌。無菌室和緩沖間都必須密閉、室內裝備的換氣設備必須有空氣過濾裝置。在獲得了無菌環(huán)境和無菌材料后，只有保持無菌狀態(tài)，才能對某種特定的已知微生物進行研究。所以控菌能力和控菌穩(wěn)定性是無菌室的核心驗收指標。

無菌室設計規(guī)范：

1.二級及三級無菌室符合中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標準:WS233-2002 《微生物和生物醫(yī)學實驗室生物安全通用準則》。
2.二級（P2）無菌室為萬級、局部百級，符合目前世界通用的美國聯邦209E標準。 二級無菌室包含高、中、初效過濾系統，小型中央空調系統，層流送風，井式回風。更衣間及風淋室采用人體自動感應系統。
3.各系統技術指標如下：更衣間及操作間送風口風速≥0.3米/秒,風淋室風速≥15米/秒,操作間與環(huán)境靜壓差≥5Pa,系統噪聲≤60dB.
4.三級（p3）無菌實驗室除具有二級無菌室的特點外,還專門設立了電子互鎖門、傳遞窗門互鎖、環(huán)氧樹脂自流平地面、下水消毒設施。配置二級生物安全柜，實驗室及緩沖間均為負壓空間，實驗間的相對壓強為-30Pa—-40Pa，緩沖間的相對壓強為-15Pa—-20Pa。

無菌室設計要求：

1．工作室應矮小、平整，面積只需4米2左右，高2.2—2.3米，內部裝修應平整、光滑，無凹凸不平或棱角等，四壁及屋頂應用不透水之材質，便于擦洗及殺菌。
2．室內采光面積大，從室外應能看到室內情況。
3．為保證無菌室的潔凈，無菌室周圍需設緩沖走廊，走廊旁再設緩沖間，其面積可小于無菌室。
4．無菌室、緩沖走廊及緩沖間均設有日光燈及供消毒空氣用紫外燈，殺菌紫外燈離工作臺以1米為宜 ，其電源開關均應設在室外。
5．無菌室與緩沖間進出口應設拉門，門與窗平齊，門縫要封緊，兩門應錯開，以免空氣對流造成污染。
6．無菌室的使用與管理

1） 無菌室應保持清潔整齊，室內僅存放最必須的檢驗用具如酒精燈、酒精棉、火柴、鑷子、接種針、接種環(huán)、玻璃鉛筆等。
2） 室內檢驗用具及凳桌等保持固定位置，不隨便移動。
3） 每2—3周用2%石炭酸水溶液擦拭工作臺、門、窗、桌、椅及地面，然后用3%石炭酸水溶液噴霧消毒空氣，最后紫外燈殺菌半小時。
4） 定期檢查室內空氣無菌狀況，細菌數應控制在10個以下，發(fā)現不符合要求時，應立即徹底消毒滅菌。 無菌室無菌程度的測定方法：取普通肉湯瓊脂平板、改良馬丁培養(yǎng)基平板各3個（平板直徑均9厘米），置無菌室各工作位置上，開蓋曝露半小時，然后倒置進行培養(yǎng)，測細菌總數應置37℃溫箱培養(yǎng)48小時；測霉菌數則應置27℃溫箱培養(yǎng)5天。細菌`霉菌總數均不得超過10個為 。
5） 無菌室殺菌前，應將所有物品置于操作之部位（待檢物例外），然后打開紫外燈殺菌30分鐘，時間一到，關閉紫外燈待用。
6） 進入無菌室前，必須于緩沖間更換消毒過的工作服、工作帽及工作鞋。
7） 操作應嚴格按照無菌操作規(guī)定進行，操作中少說話，不喧嘩，以保持環(huán)境的無菌狀態(tài)。

無菌室消毒方法：
1.無菌室定期消毒用甲醛和高錳酸鉀混合熏蒸:一般每平方米需40%甲醛10毫升、高錳酸鉀8毫升，進行熏蒸。使用時，先密閉門窗，量甲醛溶液盛入容器中、然后倒入量好的高錳酸鉀，人員隨之離開接種室，關緊房門，熏蒸20- -30分鐘即可。
2.0.1%升汞水消毒:用0.1%升汞水浸過的紗布或海綿進行指擦，或用噴霧器噴霧滅菌，使箱內的上下左右都沾上升汞水，手也可用升汞水消毒，并把袖子卷起來。噴霧后20~30分鐘，箱內的雜菌和霧滴一起落到箱底被殺死，內部的空氣就變得很清潔。
3.紫外線照射滅菌:在無菌箱中裝一支200伏、30瓦的紫外線燈管;每次開20~30分鐘，就能達到空間殺菌的目的。照射結束后，罩黑布半小時，以增強殺菌效果。
4.石炭酸噴霧:在每次接種之前，用5%石炭酸溶液噴霧，可促使空氣中的微粒和雜菌沉降，防止桌面微塵飛揚，并有殺菌作用。
5.石灰揩擦:經常用藥物熏蒸，易造成酸性環(huán)境，特別用甲醛和高錳酸鉀熏蒸長久，污染往往越來越嚴重，預防辦法可把各種藥品交替使用，過一段時間(約五周》用石灰擦洗一遍。實踐證明這樣做效果很好。

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